中性蛋白酶活力測定方法是怎樣的

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來源：CPhI制藥在線

2018-02-23

中性蛋白酶是由枯草芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵提取而得的，屬于一種內(nèi)切酶，可用于各種蛋白質(zhì)水解處理。在一定溫度、PH值下，本品能將大分子蛋白質(zhì)水解為氨基酸等產(chǎn)物。那么，中性蛋白酶活力測定方法是怎樣的？

　　中性蛋白酶是由枯草芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵提取而得的，屬于一種內(nèi)切酶，可用于各種蛋白質(zhì)水解處理。在一定溫度、PH值下，本品能將大分子蛋白質(zhì)水解為氨基酸等產(chǎn)物。那么，中性蛋白酶活力測定方法是怎樣的？

中性蛋白酶活力測定方法是怎樣的

　　酸性、中性蛋白酶活力單位在一定溫度(40oc土o.2OC)和相應的pH條件下(酸性蛋白酶pH3.0，中性蛋白酶pH7.2)，在1min內(nèi)水解酷蛋白產(chǎn)生相當于1問酣基氨基酸(由酷氨酸等同物表示)的酶量，為1個酶活單位，以U表示。

　　蛋白酶在一定的溫度和pH條件下，水解酷蛋白底物產(chǎn)生含有酣基的氨基酸(如z酷氨酸、色氨酸)，在堿性條件下，可將福林試tj(Fo!in)還原，生成鋁藍與鵲藍，其顏色的深淺與酣基氨基酸含量成正比。通過在680nm測定其吸光度，得到酶解產(chǎn)生的酣基氨基酸的量，進而計算蛋白酶活力。

　　試劑和材料：碳酸鈾溶液、三氯Z酸溶液、鹽酸溶液、鹽酸溶擅液、氫氧化納溶液。

　　福林(Folin)試劑于2000mL磨口回流裝置中加入鴿酸鈾(Na2W040)100.0g、鋁酸鈾(Na2Mo0425.0g、水700mL、85%磷酸50mL、被鹽酸100h，取下回流冷卻器，在通風櫥中加入硫酸鏗(Li2S04)50g，水50mL和數(shù)滴濃澳水(99%)，再微沸15min，以除去多余的澳(冷卻后仍有綠色需再加澳水，再煮沸除去過量的澳)，冷卻后加水定容至1000mLot昆勻、過濾。試劑應呈金黃色，貯存于棕色瓶內(nèi)。使用時，以1份福林(Folin)試劑與2份水混勻，制成稀福林(Folin)試劑。