CRISPR-Cas 系統(tǒng)是細(xì)菌和古菌的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，能夠抵御病毒和可移動(dòng)遺傳元件的入侵。盡管 CRISPR-Cas9 和 CRISPR-Cas12 系統(tǒng)的 DNA 靶向機(jī)制已經(jīng)被廣泛研究，但 RNA 靶向的 CRISPR-Cas13 系統(tǒng)的進(jìn)化起源，目前仍然不清楚。
2025年2月18日，張鋒團(tuán)隊(duì)在國(guó)際頂尖學(xué)術(shù)期刊 Cell 上發(fā)表了題為：Reprogrammable RNA-targeting CRISPR systems evolved from RNA toxin-antitoxins 的研究論文。
該研究通過(guò)混合結(jié)構(gòu)和序列進(jìn)化追蹤方法，揭示了 RNA 靶向的 CRISPR-Cas13 系統(tǒng)可能起源于一種古老的 RNA 毒素-抗毒素（TA）系統(tǒng)，特別是 AbiF 系統(tǒng)。該研究不僅提供了對(duì) CRISPR 系統(tǒng)進(jìn)化的新見(jiàn)解，還為理解 RNA 引導(dǎo)機(jī)制在免疫系統(tǒng)中的多樣性提供了重要線索。
CRISPR-Cas13 系統(tǒng)包含兩個(gè) HEPN（高等真核生物和原核生物核苷酸結(jié)合）超家族的核酸酶結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域廣泛存在于原核生物的防御系統(tǒng)中。
在這項(xiàng)最新研究中，研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)混合結(jié)構(gòu)和序列搜索，通過(guò) AlphaFold2 等深度學(xué)習(xí)工具預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，并結(jié)合 DALI 等算法進(jìn)行結(jié)構(gòu)相似性比較，從而識(shí)別出 Cas13 的祖先，發(fā)現(xiàn) Cas13 可能起源于 AbiF 系統(tǒng)。AbiF（Abortive Infection Protein F）是一種與流產(chǎn)感染相關(guān)基因編碼的毒素-抗毒素系統(tǒng)（toxin-antitoxin system，簡(jiǎn)稱(chēng)為 TA），其抗毒素是一種非編碼 RNA（ncRNA），能夠抑制 RNA 毒素的活性。
研究團(tuán)隊(duì)還發(fā)現(xiàn)了一種中間系統(tǒng) Cas13e，它同時(shí)具有 CRISPR 和 TA 系統(tǒng)的生化特性，Cas13e 是一種 RNA 引導(dǎo)的 RNA 靶向系統(tǒng)，而 AbiF 則是一種帶有 RNA 抗毒素的 TA 系統(tǒng)。AbiF 系統(tǒng)的作用機(jī)制與 CRISPR 系統(tǒng)不同，ncRNA 抗毒素通過(guò)阻斷 AbiF 的核酸酶活性位點(diǎn)來(lái)抑制其活性。Cas13e 的進(jìn)化地位處于 AbiF 與其他已知 Cas13 之間。
研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步驗(yàn)證了 Cas13e 的功能，發(fā)現(xiàn)它能夠結(jié)合 crRNA 并具有 RNA 引導(dǎo)的 RNA 切割活性。Cas13e 在結(jié)合 crRNA 后表現(xiàn)出非特異性的 RNA 切割活性，類(lèi)似于 Cas13a/b/c/d 系統(tǒng)。
通過(guò)序列和結(jié)構(gòu)的比較，研究團(tuán)隊(duì)重建了從 AbiF 到 Cas13 的進(jìn)化路徑。AbiF 基因首先發(fā)生復(fù)制，產(chǎn)生了具有額外結(jié)構(gòu)域插入的雙 HEPN 核酸酶。復(fù)制的蛋白質(zhì)逐漸失去了與順式編碼的 ncRNA 抗毒素的相互作用，轉(zhuǎn)而與 CRISPR RNA（crRNA）相互作用，最終演變?yōu)榱?RNA 引導(dǎo)的 CRISPR 系統(tǒng)。
也就是說(shuō)，AbiF 作為一種與流產(chǎn)感染（abortive infection）機(jī)制相關(guān)的毒素-抗毒素（TA）系統(tǒng)蛋白，與非編碼 RNA（ncRNA）形成穩(wěn)定復(fù)合物，作為原始防御系統(tǒng)通過(guò)誘導(dǎo)宿主細(xì)胞休眠/死亡來(lái)阻止感染（例如噬菌體感染）的擴(kuò)散，而 CRISPR-Cas13 系統(tǒng)在其基礎(chǔ)上進(jìn)化出了可編程的 RNA 靶向能力。
在這些發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，研究團(tuán)隊(duì)提出了一個(gè)進(jìn)化模型，揭示了非 RNA 引導(dǎo)的毒素核酸酶（AbiF系統(tǒng)）如何進(jìn)化為 RNA 引導(dǎo)的 CRISPR 系統(tǒng)（CRISPR-Cas13系統(tǒng)）。
● AbiF基因的復(fù)制和雙 HEPN 核酸酶的形成；
● 插入新的RNA結(jié)合域（例如REC域），使得系統(tǒng)能夠識(shí)別 crRNA 和靶 RNA 的雙鏈結(jié)構(gòu)；
● 從 TA 系統(tǒng)到 CRISPR 系統(tǒng)的完全轉(zhuǎn)變，Cas13e 作為中間系統(tǒng)，保留了 TA 系統(tǒng)和 CRISPR 系統(tǒng)的特性。
這些發(fā)現(xiàn)表明，與 CRISPR-Cas9 和 Cas12 系統(tǒng)不同，Cas13 的進(jìn)化路徑似乎是一個(gè)獨(dú)特事件。AbiF 雖然與 ncRNA 相互作用，但并不使用 ncRNA 引導(dǎo)，因此從 AbiF 到 RNA 引導(dǎo)的 CRISPR 系統(tǒng)的轉(zhuǎn)變更具挑戰(zhàn)性。這項(xiàng)研究揭示了 RNA 引導(dǎo)機(jī)制如何從非 RNA 引導(dǎo)的毒素核酸酶進(jìn)化而來(lái)，拓寬了我們對(duì)原核生物 RNA 免疫系統(tǒng)多樣性的理解。
論文鏈接：
https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(25)00103-5
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