時(shí)間

里程碑事件

2005年3月24日

國(guó)務(wù)院針對(duì)**流通和接種監(jiān)管環(huán)節(jié)制定了《**流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例》。

2006年4月4日

家疾病預(yù)防控制局針對(duì)**在儲(chǔ)存、運(yùn)輸監(jiān)管環(huán)節(jié)制定《**儲(chǔ)存和運(yùn)輸管理規(guī)范》。

2019年6月29日

廣受社會(huì)各界關(guān)注的《**管理法》表決通過(guò)，將從2019年12月1日起實(shí)施，引起社會(huì)的廣泛關(guān)注，《**管理法》是將分散在多部法律法規(guī)中的監(jiān)管規(guī)定進(jìn)行了全鏈條統(tǒng)籌整合，涵蓋**研制、生產(chǎn)、流通、預(yù)防接種各個(gè)環(huán)節(jié)，將**監(jiān)管提升到法律層級(jí)，行業(yè)人士稱這是史上最嚴(yán)的**管理法。

2019年9月2日

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心官網(wǎng)發(fā)布《**上市后生產(chǎn)工藝變更技術(shù)指導(dǎo)原則》公示稿，彌補(bǔ)了我國(guó)對(duì)**上市后生產(chǎn)工藝變更技術(shù)在法規(guī)層面和技術(shù)層面的空白。

2019年11月12日

國(guó)家**檢查中心官網(wǎng)發(fā)布《**生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查指南》（征求意見(jiàn)稿），這是國(guó)內(nèi)首部針對(duì)**生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查指南。

序號(hào)

法規(guī)依據(jù)

1

《中華人民共和國(guó)藥品管理法》

2

《中華人民共和國(guó)**管理法》

3

《中華人民共和國(guó)藥品管理法實(shí)施條例》

4

《中華人民共和國(guó)藥典》

5

《藥品注冊(cè)管理辦法》

6

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄

7

《藥品注冊(cè)核查管理規(guī)定》

8

《**儲(chǔ)存和運(yùn)輸管理規(guī)范》

9

《生物制品批簽發(fā)管理辦法》

10

《藥品不良反應(yīng)報(bào)告和監(jiān)測(cè)管理辦法》

11

《**流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例》

12

《藥品召回管理辦法》

13

《藥品說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽管理規(guī)定》

14

《藥品生產(chǎn)企業(yè)現(xiàn)場(chǎng)檢查風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定原則》

15

《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》

16

《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》

17

《食品藥品監(jiān)管總局國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)**流通監(jiān)管促進(jìn)**供應(yīng)工作的通知》（食藥監(jiān)藥化監(jiān)〔2017〕76號(hào)）

18

藥監(jiān)管理部門(mén)批準(zhǔn)的各**企業(yè)制造及檢定規(guī)程

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

 細(xì)胞基質(zhì)

細(xì)胞基質(zhì)系指可用于**生產(chǎn)的所有動(dòng)物或人源的連續(xù)傳代細(xì)胞系、二倍體細(xì)胞株、原代細(xì)胞及重組工程細(xì)胞等。企業(yè)應(yīng)當(dāng)按照《中國(guó)藥典》和藥品GMP要求建立符合生產(chǎn)要求的細(xì)胞庫(kù)。生產(chǎn)和檢定用細(xì)胞應(yīng)符合現(xiàn)行《中國(guó)藥典》三部生物制品通則中“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”的相關(guān)要求。

1) 生產(chǎn)和檢定用細(xì)胞歷史來(lái)源清晰、有證明資料。

2) 生產(chǎn)用原代細(xì)胞制備和檢定應(yīng)符合《中國(guó)藥典》的要求；制備注射用減毒活**的原代細(xì)胞和動(dòng)物組織應(yīng)來(lái)源于無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)動(dòng)物（包括雞胚）；制備口服**和滅活**的原代細(xì)胞應(yīng)來(lái)自清潔級(jí)或清潔級(jí)以上動(dòng)物。

3) 傳代細(xì)胞應(yīng)按照《中國(guó)藥典》要求建立細(xì)胞庫(kù)并符合規(guī)定。工作細(xì)胞庫(kù)的生物學(xué)特性、遺傳學(xué)特性應(yīng)與主細(xì)胞庫(kù)一致，傳代次數(shù)與已批準(zhǔn)的要求一致，不應(yīng)超過(guò)規(guī)定的代次。

4) 主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)及生產(chǎn)終末代細(xì)胞應(yīng)按照《中國(guó)藥典》的要求進(jìn)行檢定。

5) 儲(chǔ)藏容器應(yīng)當(dāng)在適當(dāng)?shù)臏囟认卤４?，并有明確的標(biāo)簽，標(biāo)簽應(yīng)至少標(biāo)記細(xì)胞的編號(hào)、名稱、代次、批號(hào)、制備日期等內(nèi)容。

6) 細(xì)胞庫(kù)應(yīng)在規(guī)定的條件下專用設(shè)備保存，專人負(fù)責(zé)；出入庫(kù)應(yīng)有規(guī)定和記錄。

7) 細(xì)胞庫(kù)存儲(chǔ)區(qū)域應(yīng)當(dāng)建立人員授權(quán)、進(jìn)出登記制度，避免非授權(quán)人員接觸細(xì)胞。

8) 儲(chǔ)存期間，應(yīng)當(dāng)能夠?qū)?chǔ)存條件（例如，液氮液位等）進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋O(jiān)控，及時(shí)發(fā)現(xiàn)儲(chǔ)存條件變化，確保細(xì)胞的保存條件。

9) 細(xì)胞庫(kù)，尤其是主細(xì)胞庫(kù)應(yīng)備份，并在不同地點(diǎn)保存，應(yīng)考慮停電、火災(zāi)等應(yīng)急情況的影響。

10) 應(yīng)對(duì)工作細(xì)胞庫(kù)復(fù)蘇能力等進(jìn)行考察，了解細(xì)胞儲(chǔ)存期間的質(zhì)量變化，考察可在**生產(chǎn)過(guò)程中同步進(jìn)行。

菌毒種

菌毒種是指直接用于**制造和檢定的細(xì)菌、病毒、DNA重組工程菌等。**生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)按照《中國(guó)藥典》和藥品注冊(cè)要求建立種子批系統(tǒng)。生產(chǎn)用菌毒種需用動(dòng)物傳代時(shí)，應(yīng)使用SPF級(jí)動(dòng)物。

1) 生產(chǎn)和檢定用菌毒種歷史來(lái)源清晰、有證明資料。

2) 應(yīng)在符合GMP條件下建立主種子批和工作種子批；工作種子批的生物學(xué)特性和遺傳學(xué)特性應(yīng)與主種子一致。

3) 應(yīng)建立生產(chǎn)用菌毒種主種子批全基因序列的背景資料，減毒活**主種子批應(yīng)進(jìn)行全基因序列測(cè)定，應(yīng)對(duì)生產(chǎn)用菌毒種已知的主要抗原表位的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，并證明在規(guī)定的使用代次內(nèi)其遺傳性狀是穩(wěn)定的。減毒活**中所含病毒或細(xì)菌的遺傳性狀應(yīng)與主種子批一致。

4) 菌毒種標(biāo)簽上應(yīng)至少標(biāo)明菌毒種編號(hào)、名稱、代次、批號(hào)、制備日期等內(nèi)容。

5) 生產(chǎn)用菌毒種的存儲(chǔ)設(shè)備需滿足存儲(chǔ)需要，菌毒種保藏應(yīng)當(dāng)備份，且備份種子批應(yīng)儲(chǔ)存于不同的地點(diǎn)或區(qū)域，在發(fā)生菌毒種儲(chǔ)存設(shè)備故障、自然災(zāi)害等情況下，能夠采取有效應(yīng)對(duì)措施。

6) 菌毒種應(yīng)在規(guī)定的條件下專用設(shè)備保存，專人負(fù)責(zé)；出入庫(kù)應(yīng)有規(guī)定和記錄。

7) 菌毒種存儲(chǔ)區(qū)域應(yīng)當(dāng)建立人員授權(quán)、進(jìn)出登記制度，避免非授權(quán)人員接觸菌毒種。

8) 菌毒種儲(chǔ)存溫度，應(yīng)符合特定菌毒種的特征要求。儲(chǔ)存期間，應(yīng)當(dāng)對(duì)儲(chǔ)存條件進(jìn)行監(jiān)控，并應(yīng)當(dāng)具備報(bào)警功能，確保菌毒種儲(chǔ)存條件符合要求。

9) 應(yīng)對(duì)菌毒種工作種子批進(jìn)行穩(wěn)定性考察，及時(shí)了解菌毒種儲(chǔ)存期間的質(zhì)量變化，考察可在**生產(chǎn)過(guò)程中同步進(jìn)行。

10) 菌毒種操作應(yīng)在相應(yīng)的生物安全級(jí)別下進(jìn)行。

11) 生產(chǎn)、科研及檢定用菌毒種應(yīng)分開(kāi)存放，不得存放于同一設(shè)備。

生產(chǎn)用原輔料

**生產(chǎn)用原輔料管理應(yīng)符合《中國(guó)藥典》三部“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”的規(guī)定，對(duì)原輔料進(jìn)行分級(jí)管理。原輔料檢查要點(diǎn)：

1) 供應(yīng)商應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)評(píng)估與審計(jì)，供應(yīng)商發(fā)生相關(guān)質(zhì)量事件時(shí)，應(yīng)通過(guò)有效方式告知采購(gòu)方。

2) 生產(chǎn)用主要原材料、輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、取樣量及過(guò)程。

3) 關(guān)注生產(chǎn)用原輔料的入廠驗(yàn)收、儲(chǔ)存條件、出入庫(kù)記錄、留樣等。

4) 動(dòng)物源性原輔料應(yīng)有非疫區(qū)來(lái)源證明。

5) 產(chǎn)品配制用穩(wěn)定劑（例如，糖類、氨基酸、碳酸氫鈉、明膠等）、佐劑及稀釋劑（如氫氧化鋁、氯化鈉等）應(yīng)符合相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)（如微生物限度、細(xì)菌內(nèi)毒素等）。

6) 配制培養(yǎng)基、培養(yǎng)液、生產(chǎn)過(guò)程中使用的原材料（例如，氨基酸、維生素、牛血清、抗生素、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、碳水化合物等）和各種溶液應(yīng)符合相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；培養(yǎng)液及生產(chǎn)用溶液儲(chǔ)存條件與時(shí)間應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

7) 生物制品工藝過(guò)程中使用的動(dòng)物源性原輔料應(yīng)證明無(wú)外源性或內(nèi)源性病毒污染，分析方法應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢定方法應(yīng)符合現(xiàn)行版藥典或相關(guān)的法規(guī)。

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

產(chǎn)品質(zhì)量回顧

1）品種工藝介紹（生產(chǎn)工藝流程圖，關(guān)鍵質(zhì)量屬性，關(guān)鍵工藝參數(shù)；如有變更，變更應(yīng)符合相關(guān)注冊(cè)要求，變更前后的工藝比較、接受標(biāo)準(zhǔn)及工藝評(píng)估）。

2）菌毒種、細(xì)胞基質(zhì)的管理及使用情況（菌毒種、細(xì)胞的關(guān)鍵屬性的監(jiān)測(cè)）。

3） 生產(chǎn)過(guò)程控制（關(guān)鍵工藝參數(shù)、中間產(chǎn)品、物料平衡、收率等）。

4）產(chǎn)品詳細(xì)的生產(chǎn)及檢驗(yàn)情況（批號(hào)、菌毒種、批間一致性、產(chǎn)品產(chǎn)量的溯源情況列表）、批量、檢驗(yàn)及批簽發(fā)情況。

5）成品的儲(chǔ)存和發(fā)運(yùn)（存儲(chǔ)溫度和運(yùn)輸溫度評(píng)價(jià)）。

6）產(chǎn)品的流向信息（成品的流向情況，包括原液批號(hào)、成品批號(hào)、數(shù)量、去向）。

7）關(guān)鍵質(zhì)量屬性分析（原液、半成品、成品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的趨勢(shì)分析；穩(wěn)定性考察趨勢(shì)分析）。

8）應(yīng)對(duì)匯總的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)產(chǎn)品的生產(chǎn)情況和質(zhì)量管理進(jìn)行總結(jié)，提出建議。

生產(chǎn)區(qū)污染控制

1) 應(yīng)盡可能使用封閉系統(tǒng)提高無(wú)菌保障和隔離水平。在工藝中使用開(kāi)放系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)采取有效的控制措施，防止污染、交叉污染、混淆和差錯(cuò)。

2) 應(yīng)避免與產(chǎn)品直接接觸物品清洗/滅菌后的二次污染。

3) 取樣、加料、中間品轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)，應(yīng)確保各類連接的無(wú)菌保障程度。

4) 關(guān)注生產(chǎn)用微生物活菌活毒區(qū)與非活菌活毒區(qū)的分區(qū)控制?；罹疃緟^(qū)工器具傳出至非活菌活毒區(qū)之前，應(yīng)充分滅活；滅活前、后工器具應(yīng)分區(qū)放置，避免交叉污染；活菌活毒區(qū)與非活菌活毒區(qū)人流、物流通道應(yīng)分開(kāi)設(shè)置；活菌活毒區(qū)與非活菌活毒區(qū)、滅活前與滅活后區(qū)域的凈化空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)分別設(shè)置，活菌活毒區(qū)應(yīng)相對(duì)負(fù)壓。

5）中間產(chǎn)品、半成品的儲(chǔ)存容器變更，例如變?yōu)橐淮涡韵到y(tǒng)，應(yīng)做變更控制、相容性試驗(yàn)及穩(wěn)定性試驗(yàn)等研究工作，加強(qiáng)實(shí)物驗(yàn)收和供應(yīng)商審計(jì)。

QC實(shí)驗(yàn)室管理

除對(duì)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查外，還應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注**產(chǎn)品鑒別、效力試驗(yàn)、特異性**試驗(yàn)、病毒滴度、抗原含量檢測(cè)、宿主蛋白殘留、DNA殘留等。

1) 測(cè)定方法應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證或確認(rèn)。

2) 新建立或改良的方法應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，還應(yīng)與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較，并關(guān)注變更后方法的注冊(cè)合規(guī)性。

3) 標(biāo)準(zhǔn)品/參考品應(yīng)可溯源。如自制工作標(biāo)準(zhǔn)品/參考品，應(yīng)建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，每批用法定標(biāo)準(zhǔn)品/參考品進(jìn)行標(biāo)化并確定有效期。

4）應(yīng)使用符合相關(guān)要求或級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，除另有規(guī)定外，均應(yīng)使用清潔級(jí)或清潔級(jí)以上的動(dòng)物；小鼠應(yīng)來(lái)自封閉群動(dòng)物或近交系動(dòng)物。

5）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)為專職人員，并應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)培訓(xùn)。

6）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)來(lái)源清晰。

共線生產(chǎn)管理

共線生產(chǎn)管理應(yīng)符合《中國(guó)藥典》、《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其附錄中的相關(guān)規(guī)定。

在原液生產(chǎn)過(guò)程中有某些特定活生物體的階段，應(yīng)當(dāng)根據(jù)產(chǎn)品特性和設(shè)備情況，采取相應(yīng)的預(yù)防交叉污染措施。

在產(chǎn)品分裝階段，使用同一分裝間、分裝設(shè)備分裝、凍干不同產(chǎn)品的，應(yīng)當(dāng)關(guān)注其防止交叉污染的措施。

1） 卡介苗與結(jié)核菌素應(yīng)在獨(dú)立廠房?jī)?nèi)生產(chǎn)，嚴(yán)格分開(kāi)。

2） 炭疽桿菌、肉毒梭狀芽孢桿菌和破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌應(yīng)在專用的設(shè)施內(nèi)生產(chǎn)。

3） 減毒活**與滅活**、不同給藥途徑的**不能在同一分裝間、同一分裝凍干設(shè)施進(jìn)行分裝和凍干。

4） 對(duì)于共線生產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告，應(yīng)包括人流和物流、微生物控制、活性物質(zhì)的理化特性、工藝特點(diǎn)、清潔工藝、環(huán)境監(jiān)測(cè)、控制策略、殘留成分限度檢測(cè)能力評(píng)估等。

5） 關(guān)注防止交叉污染的措施（例如采用階段式生產(chǎn)、封閉系統(tǒng)、直接接觸產(chǎn)品的生產(chǎn)工具按品種專用、一次性使用系統(tǒng)等）。

6） 共用設(shè)施設(shè)備的清潔驗(yàn)證。

7） 共線產(chǎn)品交叉污染控制效果評(píng)價(jià)（如年度報(bào)告）。

儲(chǔ)存和運(yùn)輸

**的儲(chǔ)存和運(yùn)輸應(yīng)符合《**流通和預(yù)防接種管理?xiàng)l例》及其相關(guān)規(guī)定。

1） 冷庫(kù)、冷藏車(chē)及冷藏箱應(yīng)根據(jù)國(guó)家要求及GSP標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證，包括熱分布，斷電、開(kāi)門(mén)、外界環(huán)境等惡劣條件挑戰(zhàn)試驗(yàn)。

2） **應(yīng)實(shí)施效期預(yù)警管理，**應(yīng)按照規(guī)定的發(fā)貨順序進(jìn)行發(fā)貨，無(wú)法在有效期內(nèi)配送至接種單位的**不得進(jìn)入流通環(huán)節(jié)。

3） 如采用配送企業(yè)運(yùn)送產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)符合上述有關(guān)規(guī)定，至少包括資質(zhì)審核、配送能力評(píng)估、簽訂儲(chǔ)存配送合同和質(zhì)量協(xié)議、配送企業(yè)資料備案等。

4） 發(fā)運(yùn)記錄應(yīng)完整，至少包括產(chǎn)品名稱、規(guī)格、批號(hào)、數(shù)量、收貨單位和地址、聯(lián)系方式、發(fā)貨日期、運(yùn)輸方式等。

5） 追溯體系應(yīng)完整，應(yīng)保證**最小包裝單位生產(chǎn)和銷售環(huán)節(jié)的可追溯性。

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

種子復(fù)蘇

工作代種子接種在適宜的培養(yǎng)基上，經(jīng)傳代擴(kuò)增至規(guī)定代次和規(guī)模，獲得生產(chǎn)用種子。

1) 菌種或細(xì)胞種子遺傳穩(wěn)定性確認(rèn)。

2) 培養(yǎng)物做純菌檢查，確保種子培養(yǎng)液無(wú)污染。

3) 生產(chǎn)用種子代次應(yīng)為批準(zhǔn)的固定代次。

4) 生長(zhǎng)狀態(tài)觀察及生物學(xué)特征確認(rèn)。

5) 應(yīng)使用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基配方。

發(fā)酵培養(yǎng)和收獲

生產(chǎn)用種子按比例接種至大罐培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)菌或細(xì)胞的生長(zhǎng)特性在發(fā)酵過(guò)程中適當(dāng)補(bǔ)充所需的營(yíng)養(yǎng)物，控制培養(yǎng)溫度、攪拌速度、通氣量、通氣方式、罐壓等，同時(shí)監(jiān)控溶氧、pH值、生長(zhǎng)濃度等。培養(yǎng)過(guò)程或培養(yǎng)結(jié)束取樣進(jìn)行純菌檢查。

1) 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)對(duì)照細(xì)胞外源因子檢測(cè)應(yīng)符合規(guī)定。

2) 關(guān)注培養(yǎng)曲線及收獲期狀態(tài)（培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)濃度）；發(fā)酵培養(yǎng)的工藝驗(yàn)證數(shù)據(jù)。

3) 收獲培養(yǎng)物純度、質(zhì)粒保有率（外源基因拷貝數(shù)）檢查。

4) 細(xì)胞培養(yǎng)所使用的生物源性物料（如牛血清、胰蛋白酶）的質(zhì)量控制及使用濃度。

5) 應(yīng)使用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基配方。

6) 大罐培養(yǎng)過(guò)程中溶氧、pH值、溫度、攪拌速度和通氣量等參數(shù)的監(jiān)測(cè)與記錄。

純化

將收獲的菌體或細(xì)胞經(jīng)適宜方法破碎，以過(guò)濾、離心超濾等方法去除菌體/細(xì)胞（或碎片），超濾后的料液進(jìn)行鹽析或凝膠吸附進(jìn)行粗純；使用密度梯度離心法、層析法等進(jìn)行精純。

1) 關(guān)注破碎、離心、深層過(guò)濾、超濾、鹽析等工序的各項(xiàng)質(zhì)量控制參數(shù)。

2) 柱層析工藝應(yīng)對(duì)層析系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行驗(yàn)證，包括系統(tǒng)設(shè)備關(guān)鍵傳感器的校驗(yàn)（通常為紫外、電導(dǎo)、流速、pH等）、關(guān)鍵配件的更換標(biāo)準(zhǔn)或周期、系統(tǒng)清潔或消毒驗(yàn)證等。

3) 密度梯度離心純化方法和柱層析純化方法的介質(zhì)使用次數(shù)和層析柱清潔方法等應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

4) 應(yīng)驗(yàn)證純化過(guò)程中所使用的表面活性劑和沉淀劑已有效去除。

5) 純化后如需進(jìn)行甲醛處理，應(yīng)控制蛋白濃度、溫度、加入的甲醛濃度和作用時(shí)間。

6) 中間品的儲(chǔ)存方式、條件和儲(chǔ)存時(shí)限應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

原液制備

純化產(chǎn)物稀釋和除菌過(guò)濾后即為原液。

1) 應(yīng)評(píng)估除菌過(guò)濾前藥液微生物負(fù)載狀況，除菌濾芯在使用前后應(yīng)進(jìn)行完整性檢測(cè)。

2) 關(guān)注抗原收獲率，包括收獲率控制范圍。

3) 原液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌檢查、蛋白質(zhì)濃度、特異蛋白帶、純度、細(xì)菌內(nèi)毒素、末端氨基酸序列等檢查；重組細(xì)胞株生產(chǎn)的原液還應(yīng)關(guān)注牛血清白蛋白殘留量、細(xì)胞DNA殘留量、細(xì)胞蛋白殘留量測(cè)定。

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

菌種培養(yǎng)

菌種培養(yǎng)是指工作種子批菌種經(jīng)過(guò)復(fù)蘇、傳代擴(kuò)增至規(guī)定代次和規(guī)模，獲得生產(chǎn)用種子用于大罐（發(fā)酵）培養(yǎng)。"

1) 菌種傳代期間，應(yīng)進(jìn)行純菌檢查或染色鏡檢以確保用于擴(kuò)大培養(yǎng)的種子無(wú)污染。

2) 培養(yǎng)條件應(yīng)控制溫度、時(shí)間、二氧化碳濃度等參數(shù)，液體培養(yǎng)的應(yīng)考慮攪拌及通氣。

3) 可采取鏡檢、OD值測(cè)定、pH值測(cè)定、絮狀單位測(cè)定等方法對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行觀察。

4) 應(yīng)使用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基配方。

發(fā)酵培養(yǎng)

生產(chǎn)用種子按規(guī)定的比例接種至大罐培養(yǎng)基，采用合適的培養(yǎng)條件，在培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)取樣進(jìn)行純菌檢查或染色鏡檢，以保證沒(méi)有雜菌污染。"

1) 生產(chǎn)用種子應(yīng)為批準(zhǔn)的固定代次。

2) 應(yīng)使用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基配方。

3) 大罐培養(yǎng)過(guò)程中溶氧、pH值、溫度、攪拌速度和通氣量等參數(shù)的監(jiān)測(cè)與記錄。

4) 培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌濃度、抗原滴度、血凝滴度、絮狀單位的檢測(cè)和確認(rèn)。關(guān)注細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線及收獲期狀態(tài)。

5) 培養(yǎng)物殺菌溫度、時(shí)間、攪拌速度、殺菌劑濃度的控制和確認(rèn)。

6) 對(duì)發(fā)酵罐（系統(tǒng)）各項(xiàng)功能（參數(shù)控制、數(shù)據(jù)采集等）進(jìn)行驗(yàn)證和確認(rèn)。

7) 發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵罐的清洗、消毒的驗(yàn)證及確認(rèn)。

殺菌與多糖收獲

細(xì)菌性多糖**是指采用各種生物技術(shù)提取細(xì)菌的莢膜多糖抗原，經(jīng)純化后加入適宜的穩(wěn)定劑制造而成的**。

大罐培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行殺菌，一般采用甲醛殺菌，如傷寒沙門(mén)氏菌、腦膜炎球菌以及b型流感嗜血桿菌；也可采用脫氧膽酸鈉溶液或冷酚溶液進(jìn)行殺菌，如肺炎球菌。殺菌后，采用離心法或其他合適方法去除菌體，收集上清液提取多糖。

1) 培養(yǎng)終點(diǎn)（時(shí)間、細(xì)菌濃度、pH值等）的確定，并進(jìn)行純菌檢查。

2) 殺菌方法驗(yàn)證、殺菌劑加入量及相關(guān)參數(shù)如溫度、時(shí)間、攪拌速度的控制與確認(rèn)。

3) 關(guān)注人員操作規(guī)范和活菌操作區(qū)生物安全防護(hù)措施。

多糖純化

多糖純化包括多糖粗制和多糖精制過(guò)程。

1) 關(guān)注多糖粗制、精制過(guò)程的控制參數(shù)。

2) 粗制多糖、精制多糖的存放條件和效期，應(yīng)有驗(yàn)證數(shù)據(jù)支持。

3) 關(guān)注共用生產(chǎn)設(shè)備的清潔和避免交叉污染的措施。

4) 純化過(guò)程中通常會(huì)使用多種有機(jī)溶劑，關(guān)注有機(jī)溶劑的使用及去除驗(yàn)證和監(jiān)測(cè)。

原液制備

多糖**的原液是指將干燥后冷凍保存的精制多糖，用滅菌注射用水或滅菌磷酸鹽緩沖液溶解，再經(jīng)除菌過(guò)濾之后獲得的**中間品，稱作多糖原液，對(duì)于多價(jià)**則稱為混合前單價(jià)多糖原液。

1) 關(guān)注原液批號(hào)，尤其對(duì)于多價(jià)**的各型抗原，應(yīng)有防止批號(hào)混淆、出錯(cuò)的預(yù)防措施。

2) 原液保存溫度、保存條件（避光、防潮）和效期，應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

殺菌及毒素收獲

大罐培養(yǎng)結(jié)束、純菌檢查合格后，向培養(yǎng)液中加入適宜濃度的殺菌劑殺菌，按批準(zhǔn)的工藝進(jìn)行純化或脫毒。

1) 應(yīng)對(duì)毒素效價(jià)（絮狀單位）、血凝滴度、細(xì)菌濃度等進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并確定培養(yǎng)終點(diǎn)。

2) 關(guān)注人員活菌操作區(qū)生物安全防護(hù)措施。

3) 殺菌方法應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證（殺菌方法具體參數(shù)：殺菌劑、濃度、時(shí)間）。

4) 毒素效價(jià)、血凝滴度檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室適用性確認(rèn)。

毒素精制純化

應(yīng)用經(jīng)批準(zhǔn)的方法對(duì)收獲液純化得到精制毒素。一般多采用硫酸銨鹽析、蔗糖密度梯度離心、透析或超濾等方法。

1) 毒素純化方法驗(yàn)證。

2) 硫酸銨添加方式、濃度、鹽析時(shí)間的控制和確認(rèn)。透析或超濾后殘留硫酸銨的測(cè)定。

3) 過(guò)濾方式、設(shè)備、材質(zhì)、孔徑的選擇和確認(rèn)，過(guò)濾操作參數(shù)的控制和確認(rèn)。

4) 離心溫度、轉(zhuǎn)速和時(shí)間的控制和確認(rèn)，蔗糖密度梯度離心需對(duì)蔗糖濃度的確認(rèn)。

5) 中間品的儲(chǔ)存方式、條件和儲(chǔ)存時(shí)限應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

脫毒及類毒素制備

精制抗原/毒素需對(duì)**組份進(jìn)行脫毒，脫毒劑包括甲醛、戊二醛等。脫毒并去除脫毒劑后即為精制類毒素。

1) 脫毒時(shí)抗原/毒素濃度的控制和確認(rèn)。

2) 脫毒劑的添加順序、濃度及加入比例的控制和確認(rèn)。

3) 脫毒溫度、時(shí)間控制和確認(rèn)。

4) 脫毒試驗(yàn)結(jié)果的確認(rèn)。

5) 去除脫毒劑的方法應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

6) 中間品的儲(chǔ)存方式、條件和儲(chǔ)存時(shí)限應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

類毒素原液制備

將精制類毒素中根據(jù)工藝要求加入適宜防腐劑，經(jīng)過(guò)除菌過(guò)濾，即為精制類毒素原液。

1) 原液保存條件和效期應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

2) 關(guān)注原液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)結(jié)果，尤其是**逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)、效價(jià)試驗(yàn)、絮狀單位、純度、無(wú)菌檢查、特異性**檢查。

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

多糖抗原制備

多糖抗原的制備及其工藝檢查要點(diǎn)，參考“細(xì)菌性多糖**”章節(jié)。

載體蛋白制備

用于結(jié)合**的載體蛋白，目前已知的有破傷風(fēng)類毒素TT、白喉類毒素DT、無(wú)毒的白喉突變株毒素CRM197、B群腦膜炎球菌外膜蛋白復(fù)合物OMP等。

類毒素載體蛋白的生產(chǎn)工藝（破傷風(fēng)類毒素和白喉類毒素）基本相同，采用柱色譜法或其他經(jīng)批準(zhǔn)的方法對(duì)精制類毒素原液進(jìn)一步純化，并配制至適宜濃度即成載體蛋白。重組表達(dá)的載體蛋白檢查要點(diǎn)可參考重組類**。

1）載體蛋白各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)應(yīng)符合《中國(guó)藥典》與產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求，尤其應(yīng)注意載體蛋白的純度。

2）純化過(guò)程關(guān)鍵工藝參數(shù)的控制，柱層析工藝應(yīng)對(duì)層析介質(zhì)、緩沖液離子強(qiáng)度（鹽濃度）和pH值、流速及壓力、平衡體積、上樣量、收樣范圍等進(jìn)行控制。

3）明確規(guī)定層析柱的合格標(biāo)準(zhǔn)及使用壽命，層析柱的清潔或消毒、保存和再生的驗(yàn)證。

4）柱層析工藝應(yīng)對(duì)層析系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行驗(yàn)證，包括系統(tǒng)設(shè)備關(guān)鍵傳感器的校驗(yàn)（通常為紫外、電導(dǎo)、流速、pH等）、關(guān)鍵配件的更換標(biāo)準(zhǔn)或周期、系統(tǒng)清潔或消毒驗(yàn)證等。

結(jié)合物制備

多糖抗原與載體蛋白之間的結(jié)合是利用多糖和蛋白分子中存在的羧基、半縮醛、氨基/亞氨基、巰基/二硫鍵、羥基等功能鍵，通過(guò)共價(jià)結(jié)合完成的。目前常見(jiàn)的方法是溴化氰（CNBr）活化法和還原氨基化法等方法。多糖抗原與載體蛋白的結(jié)合反應(yīng)結(jié)束后，將結(jié)合反應(yīng)混合物用適宜的液體透析或超濾透析，即獲得多糖蛋白結(jié)合物。

1) 應(yīng)建立測(cè)定多糖活化或/和蛋白活化程度的方法、關(guān)鍵參數(shù)的控制。

2) 采用透析或超濾工藝去除多糖衍生物、蛋白衍生物中殘留的化學(xué)試劑應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

3) 關(guān)注劇毒化學(xué)試劑管理。

4) 衍生物、結(jié)合物保存條件和時(shí)間應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

結(jié)合物純化與原液制備

多糖結(jié)合物經(jīng)柱層析等方法純化得到結(jié)合物原液。

1) 層析柱純化方法、介質(zhì)使用次數(shù)（即壽命）、層析柱清潔方法等應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

2) 原液的儲(chǔ)存方式、條件和儲(chǔ)存時(shí)限應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。

3) 關(guān)注原液檢測(cè)結(jié)果，尤其是多糖含量、多糖與蛋白質(zhì)比值、高分子結(jié)合物含量或游離多糖含量、細(xì)菌內(nèi)毒素含量、化學(xué)試劑殘留量等。

關(guān)鍵點(diǎn)

檢查要點(diǎn)

半成品

1) 半成品各組分（如原液、佐劑、穩(wěn)定劑、稀釋液、防腐劑等）實(shí)際加入量應(yīng)與計(jì)算量一致。

2) 佐劑配制及儲(chǔ)存應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，并有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。

3) 吸附過(guò)程應(yīng)進(jìn)行控制，并明確控制指標(biāo)。

4) 各組分的加入順序應(yīng)符合工藝要求，并按經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的參數(shù)（如轉(zhuǎn)速、攪拌時(shí)間等）混合，確保半成品均一性。

5) 半成品需要存放的，應(yīng)保存在合適的容器中并按經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的條件（如溫度、時(shí)間）下儲(chǔ)存。

6) 半成品轉(zhuǎn)運(yùn)應(yīng)采取有效措施（如溫度、時(shí)間、密封性等）控制質(zhì)量（包括無(wú)菌、有效物質(zhì)含量等）。

7) 對(duì)于混懸狀或含有佐劑的**產(chǎn)品，還應(yīng)當(dāng)關(guān)注分裝過(guò)程中的產(chǎn)品的均一性。

8) 對(duì)溫度較為敏感的**制品，關(guān)注分裝過(guò)程中的對(duì)產(chǎn)品溫度的控制措施。

9) 半成品配制、分裝及軋蓋應(yīng)在規(guī)定的時(shí)限內(nèi)完成。

10) 關(guān)注分裝后剩余半成品及活菌活毒區(qū)污物的滅活處理措施。

11) 應(yīng)按要求對(duì)制品進(jìn)行燈檢，使用自動(dòng)燈檢機(jī)進(jìn)行燈檢前，應(yīng)進(jìn)行燈檢功能測(cè)試。

12）關(guān)注產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中脫冷鏈時(shí)間與穩(wěn)定性支持?jǐn)?shù)據(jù)。