為了規(guī)范基因治療產(chǎn)品的非臨床研究，統(tǒng)一評價標準，引導基因治療產(chǎn)品的研究與申報，提高企業(yè)研發(fā)效率，并與ICH相關(guān)指導原則工作同步，CDE通過前期調(diào)研、ICH S12《基因治療產(chǎn)品非臨床生物分布考慮》國內(nèi)專家工作組起草、專家咨詢以及部門技術(shù)委員會討論，2021年12月3日，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心官網(wǎng)正式發(fā)布《基因治療產(chǎn)品非臨床研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》（成文時間2021年11月30日），自發(fā)布之日起實施。本文主要基于CDE《細胞治療產(chǎn)品研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》、《當前對CAR-T類產(chǎn)品非臨床研究與評價的一些考慮》和《CAR-T細胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》，為大家梳理了本指導原則中關(guān)于基因治療產(chǎn)品非臨床研究與評價考慮關(guān)鍵內(nèi)容并結(jié)合自己的解讀與大家分享。

       一、基因治療產(chǎn)品非臨床研究與評價研究挑戰(zhàn)

       隨著基因治療技術(shù)發(fā)展日新月異，基因治療取得了突破性進展，為難治性疾病提供了全新的治療理念和思路。有必要制定合適的指導原則規(guī)范和引導這一新興藥物產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展?；蛑委煯a(chǎn)品涉及的技術(shù)比較新穎，沒有積累傳統(tǒng)藥物一樣成熟的非臨床研究與評價的技術(shù)標準，存在較大的不確定性，ICH組織也開始協(xié)調(diào)基因治療領(lǐng)域的國際注冊技術(shù)要求。CDE基于行業(yè)發(fā)展和監(jiān)管的需要，制定本指導原則，以明確基因治療產(chǎn)品非臨床研究內(nèi)容，統(tǒng)一評價標準，提高研發(fā)效率，同時積累基因治療產(chǎn)品研發(fā)和監(jiān)管經(jīng)驗，更好更有效地參與ICH基因治療指導原則制定工作，建立協(xié)調(diào)一致的國際行業(yè)標準。

       二、基因治療產(chǎn)品非臨床研究主要內(nèi)容

       基于目前的認知，與常規(guī)的非臨床研究一樣，基因治療產(chǎn)品的非臨床研究建議遵循3R原則（替代/減少/優(yōu)化），以避免不必要的動物及其它資源的使用?；蛑委煯a(chǎn)品與傳統(tǒng)藥物相比，非臨床研究與評價存在諸多差異，目前非臨床評價較大程度依賴于動物疾病模型，但是人員細胞對于動物而言就屬于異源性，從動物的反應(yīng)來推斷人體的反應(yīng)，不夠準確，由于基因治療產(chǎn)品種類、作用機制、作用特點、給藥途徑、安全性風險等方面的差異，應(yīng)基于風險分析設(shè)計并開展非臨床研究，綜合評估臨床試驗受試者潛在風險-獲益，隨著技術(shù)的不斷完善，CDE制定《基因治療產(chǎn)品非臨床研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》，為基因治療產(chǎn)品非臨床研究設(shè)計提供建議，并作為非臨床評價的參考以支持開展相應(yīng)的臨床試驗?；蛑委煯a(chǎn)品非臨床研究為臨床試驗提供支持性信息，研究內(nèi)容一般為藥理學、藥代動力學、毒理學。

       1、適用范圍

       2、基因治療產(chǎn)品非臨床研究——藥理學主要內(nèi)容

       基因治療產(chǎn)品藥理學研究是為了在體內(nèi)、體外研究產(chǎn)品與治療靶點相關(guān)的作用機制和效應(yīng)，明確基因治療產(chǎn)品的生物學作用特點，應(yīng)選擇合適的體內(nèi)或體外模型進行，并以此評價基因治療產(chǎn)品在人體中潛在治療作用和效果，有助于后續(xù)非臨床和臨床試驗的劑量選擇。

       2.1 如何選擇藥效學評價研究的動物模型？

       動物疾病/損傷模型可能相對正常健康動物模型更加適于評價“風險-獲益”關(guān)系，更有機會發(fā)現(xiàn)可以用于臨床試驗監(jiān)測的活性/**生物標志物。選擇動物模型時應(yīng)考慮以下因素：

       (1)受試物在動物模型中復制能力和轉(zhuǎn)導（轉(zhuǎn)染、感染）特性；

       (2)動物模型中與受試物相關(guān)的細胞/受體表達和組織分布；

       (3)受試物中生物調(diào)節(jié)活性的組分對動物模型轉(zhuǎn)基因的表達水平和組織表達特異性的影響；

       (4)受試物導入基因產(chǎn)物引起的生物學效應(yīng)；

       (5)動物預存免疫學狀態(tài)對受試物的影響；

       (6)動物模型內(nèi)在的與導入基因同源的基因及其產(chǎn)物對藥效的影響；

       (7)轉(zhuǎn)基因動物用于特定受試物藥效評價的適用性；

       (8)動物模型實際可行的安全劑量和體積；

       (9)受試物在動物模型中的生物分布特征等。

       注意事項：在選擇動物疾病/損傷模型時需要考慮其局限性，包括模型內(nèi)在的固有變異、歷史/基線數(shù)據(jù)不足、生理功能和解剖結(jié)構(gòu)的技術(shù)性限制、模擬人體疾病/損傷病理過程的可靠性等。如果單個動物試驗?zāi)Ｐ筒蛔阋哉撟C相關(guān)問題，則應(yīng)采用多種動物模型開展相應(yīng)研究，進行綜合分析評價。

       2.2 藥效學研究如何進行試驗設(shè)計？

       (1)概念驗證研究（POC）：

       為臨床試驗提供可行性和有效性的非臨床證據(jù)，并提供可能的生物學作用機制、潛在的安全性問題等信息，包括體外研究和體內(nèi)研究。

       (2)安全藥理學研究：

       是研究受試物在治療劑量范圍內(nèi)或治療范圍以上劑量時，對生理功能潛在的非期望作用，一般包括對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的影響，通常應(yīng)在臨床試驗前完成。采用基于風險的評價策略開展基因治療產(chǎn)品的安全藥理學試驗，考慮因素一般包括：導入基因作用機制、載體類型、生物分布、給藥途徑和臨床給藥方案等。安全藥理學試驗通常采用單次給藥方式，其研究終點也可以納入到一般毒理學試驗中。

       3、基因治療產(chǎn)品非臨床研究——藥代動力學主要內(nèi)容

       3.1 藥代動力學研究如何進行試驗設(shè)計？

       (1)暴露量：根據(jù)產(chǎn)品具體特點考慮非臨床研究中的實際暴露情況。

       (2)生物分布：生物分布是受試物在相關(guān)動物種屬中給藥部位、靶組織和非靶組織包括體液（例如血液、腦脊液、玻璃體液）在內(nèi)的體內(nèi)分布、存續(xù)和清除。如采用足夠的劑量，以臨床擬用的給藥途徑，在相關(guān)動物種屬或動物模型中開展，不僅包括導入基因的檢測，還可能包括導入基因表達產(chǎn)物、載體的檢測等。

       (3)脫落：指基因治療產(chǎn)品通過排泄物（尿液、糞便）、分泌物（唾液、鼻咽液等）或皮膚（膿皰、瘡、傷口）排出體外。如根據(jù)復制型基因治療產(chǎn)品的特點評估開展脫落分析的必要性。

       4、基因治療產(chǎn)品非臨床研究——毒理學研究主要內(nèi)容

       4.1 一般毒理學試驗設(shè)計的考慮要點？

       (1)動物種屬選擇：所選動物種屬應(yīng)與基因治療產(chǎn)品具有良好的生物學相關(guān)性，采用相關(guān)動物種屬開展試驗。

       (2)劑量設(shè)計：給藥劑量應(yīng)該包括在最合適的非臨床藥效模型中確定的藥效劑量范圍或擬推薦的臨床劑量范圍。最高劑量一般期望獲得明顯**反應(yīng)的相關(guān)信息，通常為藥效學最高劑量的一定倍數(shù)或擬推薦臨床最高劑量的一定倍數(shù)。

       (3)分組：設(shè)低、中、高3個劑量組，以及合適的對照組，例如溶媒、輔料、空載體、含有非功能轉(zhuǎn)基因的載體等對照組。

       (4)給藥方案：應(yīng)最 大程度地模擬臨床擬用給藥方案，給藥途徑、給藥頻率和給藥期限應(yīng)能適當反映臨床使用情況。對于臨床研究擬單次給藥的基因治療產(chǎn)品，可開展擴展的單次給藥或重復給藥**試驗；對于臨床研究擬多次給藥的基因治療產(chǎn)品，應(yīng)進行重復給藥**試驗，給藥次數(shù)和給藥頻率一般不應(yīng)低于臨床給藥次數(shù)和頻率。

       (5)試驗期限：通常會長于其它生物制品的標準**試驗持續(xù)時間，應(yīng)包括多個解剖時間點（至少應(yīng)包括導入基因峰值時間點、穩(wěn)態(tài)時間點等），以便評價基因治療產(chǎn)品發(fā)揮作用的持續(xù)性，以及劑量/暴露量與**反應(yīng)、生物分布與**反應(yīng)的關(guān)系。

       (6)檢測指標：除常規(guī)觀察指標外，一般毒理學試驗需結(jié)合基因治療產(chǎn)品特性，考慮增加合適的觀察指標，如生物活性細胞因子分泌、異常/異位增生性病變、免疫原性/免疫**等。

       4.2 免疫原性和免疫**研究如何進行？

       免疫原性可能來源于產(chǎn)品中的非人源化組分、導入基因的表達產(chǎn)物、載體、基因編輯產(chǎn)生的非預期的肽/蛋白質(zhì)等。病毒載體類基因治療產(chǎn)品相對更容易產(chǎn)生免疫原性。此外，還應(yīng)考慮實驗動物預存免疫對試驗的影響；已知對免疫系統(tǒng)有影響的基因治療產(chǎn)品，如編碼生長因子、細胞因子等的產(chǎn)品，通常需要開展免疫**研究，應(yīng)包括體液和/或細胞免疫終點評價。

       4.3 生殖**研究如何進行？

       通常需要開展胚胎-胎仔發(fā)育**和圍產(chǎn)期**研究，除非有基于具體產(chǎn)品類型的特殊考慮并具有科學合理性。如果基因治療產(chǎn)品擬用于有生育可能或妊娠人群，應(yīng)研究產(chǎn)品對胎兒的影響（例如細胞因子局部生成后通過胎盤轉(zhuǎn)運），開展胚胎-胎仔發(fā)育和圍產(chǎn)期**試驗。如果在一般毒理學試驗中發(fā)現(xiàn)有潛在的生殖器官**反應(yīng)，應(yīng)開展生育力和早期胚胎發(fā)育**試驗。

       4.4 遺傳**研究考慮要點？

       目前對于判斷細胞基因組插入/修飾是否會產(chǎn)生遺傳**、是否最終會發(fā)生癌變依然還缺乏系統(tǒng)的認知，需要分析基因組改變（載體或遺傳物質(zhì)整合進基因組、對基因組編輯等）的特征，并評估相關(guān)潛在風險。

       通常不需要進行標準的遺傳**組合試驗，但應(yīng)根據(jù)基因治療產(chǎn)品的特點、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導入基因序列結(jié)構(gòu)等，評估基因治療產(chǎn)品整合進基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳**研究。

       基因修飾噬菌體、細菌和真菌相關(guān)的產(chǎn)品可以不進行遺傳**研究，一般認為這些產(chǎn)品通常不會直接與宿主細胞基因組發(fā)生相互作用。

       4.5 致癌性研究考慮要點？

       標準的嚙齒類動物致癌性試驗一般不適用于評價基因治療產(chǎn)品?？刹捎米C據(jù)權(quán)重（7WoE）方法來評估致癌性風險，必要時進行致癌性研究。

       4.6 復制型病毒風險考慮要點？

       采用復制缺陷病毒載體的基因治療產(chǎn)品，需要評估在生產(chǎn)的過程中是否有可能產(chǎn)生復制型病毒，應(yīng)考慮到該病毒在不同物種之間的流行性以及傳播性。

       4.7局部耐受性考慮要點？

       根據(jù)產(chǎn)品類型、給藥途徑和臨床試驗方案，某些基因治療產(chǎn)品（例如眼內(nèi)給藥、肌肉注射、瘤內(nèi)給藥等）應(yīng)開展局部耐受性試驗，適當時可以結(jié)合在一般毒理學試驗中進行。

       參考文獻

       [1]www.cde.org.cn.