生物制品作為大分子藥品，以兼具復(fù)雜生產(chǎn)工藝和復(fù)雜質(zhì)量屬性，被世界各國(guó)藥政當(dāng)局給予關(guān)注和嚴(yán)格監(jiān)管。同樣，生物制品的注冊(cè)要求和日常監(jiān)管要求，也和監(jiān)管方對(duì)化藥、中藥等技術(shù)要求體現(xiàn)出明顯不同的特征。EMA作為歐盟一體化產(chǎn)物，自成立以來(lái)就承擔(dān)了對(duì)于復(fù)雜藥品的管理法規(guī)和政策制定和技術(shù)審評(píng)任務(wù)；對(duì)于生物制品的管理，EMA一直保持謹(jǐn)慎和透明的政策。

       EMA為了促進(jìn)行業(yè)和監(jiān)管方的順利溝通，發(fā)布了很多技術(shù)問(wèn)答；這些問(wèn)答涵蓋GMP、各類具體問(wèn)題和通用技術(shù)問(wèn)題。在2023年9月，EMA最新發(fā)布了針對(duì)生物制品的技術(shù)問(wèn)答，為行業(yè)人士了解歐盟生物制品注冊(cè)要求提供了一個(gè)窗口。

       近幾年，隨著中國(guó)創(chuàng)新藥企業(yè)實(shí)力在不斷增強(qiáng)，越來(lái)越多的企業(yè)開(kāi)啟了生物制品在歐盟注冊(cè)之旅。其中復(fù)星醫(yī)藥集團(tuán)下屬的復(fù)宏漢霖較早的把單抗產(chǎn)品推向歐盟市場(chǎng)，已經(jīng)在注冊(cè)工作和GMP認(rèn)證工作方面取得成功。筆者搜集EMA官網(wǎng)的涉及生物制品的技術(shù)問(wèn)答，翻譯整理，希望可以為行業(yè)發(fā)展提供借鑒。下面技術(shù)問(wèn)題次序按照EMA官網(wǎng)發(fā)布的次序來(lái)依次介紹。

       ◆返工管理部分

       1、是否應(yīng)該在申報(bào)資料中明確涵蓋生物制品返工工藝？

       答復(fù)：如果生物制品申報(bào)資料中未提及返工工藝，則假定未申請(qǐng)返工工藝。但是，鼓勵(lì)申請(qǐng)人在CTD文件的第3.2.S.2.2或3.2.P.3.3部分中明確說(shuō)明：

       -可以在哪個(gè)步驟進(jìn)行返工處理。這應(yīng)該得到適當(dāng)?shù)墓に囼?yàn)證數(shù)據(jù)的支持；

       -也可以在制造工藝中的任何步驟都沒(méi)有返工描述。藥品上市申請(qǐng)批準(zhǔn)后可以通過(guò)變更程序增加返工工藝。

       ◆原材料和培養(yǎng)基管理

       1、是否應(yīng)在申報(bào)資料中反映培養(yǎng)基成分的詳細(xì)組成?

       答復(fù)：如果培養(yǎng)基是從外部供應(yīng)商采購(gòu)的，并且無(wú)法獲得培養(yǎng)基組分的定量構(gòu)成細(xì)節(jié)，則培養(yǎng)基組分的定性組成信息就足夠了。在這種情況下，應(yīng)在CTD文件的第3.2.S.2.3節(jié)中確認(rèn)與供應(yīng)商達(dá)成協(xié)議，在培養(yǎng)基發(fā)生變更時(shí)通知MAH。

       ◆分析方法識(shí)別碼部分

       1、 分析方法識(shí)別號(hào)碼應(yīng)該包括在生物制品申報(bào)資料中嗎?

       答復(fù)：內(nèi)控分析方法的識(shí)別號(hào)碼應(yīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)中。方法描述和方法驗(yàn)證摘要應(yīng)更新，以包括非藥典方法的內(nèi)控方法識(shí)別號(hào)碼。需要這些信息，以便在放行標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)與用于檢測(cè)的分析方法的描述和驗(yàn)證文件之間提供明確的關(guān)聯(lián)聯(lián)系。

       ◆工藝驗(yàn)證、工藝相關(guān)雜質(zhì)去除、工藝相關(guān)雜質(zhì)測(cè)試部分

       1. 生物制品原液/成品標(biāo)準(zhǔn)中是否可以省略與工藝相關(guān)的雜質(zhì)檢測(cè)?

       答復(fù)：如果通過(guò)驗(yàn)證研究證明可以一致地去除工藝相關(guān)的雜質(zhì)，并且有足夠的批次數(shù)據(jù)，則可以對(duì)工藝相關(guān)的雜質(zhì)檢測(cè)采取非常規(guī)檢測(cè)策略。更好的做法是，在工藝評(píng)價(jià)研究中通過(guò)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)或在相關(guān)制造步驟中展示穩(wěn)健的雜質(zhì)去除能力來(lái)證明對(duì)雜質(zhì)控制能力。當(dāng)在最壞的條件下運(yùn)行時(shí)，相關(guān)的生產(chǎn)步驟能夠?qū)㈦s質(zhì)去除到足夠的水平，這應(yīng)該是合理的。

       這不適用于具有高安全風(fēng)險(xiǎn)的雜質(zhì)和蛋白質(zhì)雜質(zhì)(如HCPs)，這些雜質(zhì)通常需要常規(guī)控制。

       ◆宿主細(xì)胞蛋白測(cè)試、生物制品原液標(biāo)準(zhǔn)部分

       1. 生物制品原液標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)該包括宿主細(xì)胞蛋白檢測(cè)嗎?

       宿主細(xì)胞蛋白（HCP）檢測(cè)通常是原液標(biāo)準(zhǔn)的一部分，視情況而定。HCP的常規(guī)控制被認(rèn)為是重要的，因?yàn)檫@可能是一個(gè)相關(guān)的安全參數(shù)，即僅根據(jù)工藝驗(yàn)證研究省略HCP檢測(cè)是不合適的。在獲得足夠的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)和大量的批次數(shù)據(jù)證明HCP水平持續(xù)處于較低水平之前，應(yīng)在S.4.1中包括HCP的放行標(biāo)準(zhǔn)，并在S.4.5中規(guī)定臨床批次合格的上限。如果滿足以下條件，HCP可在中間體上進(jìn)行測(cè)試，并報(bào)告為關(guān)鍵工藝控制：

       o 申請(qǐng)人對(duì)制造工藝有廣泛的了解和控制（應(yīng)確定影響HCP水平的關(guān)鍵工藝參數(shù)），

       o 縮小規(guī)模的工藝確認(rèn)研究，隨后是規(guī)?；に囼?yàn)證和批次數(shù)據(jù)結(jié)果，證明HCP處于合格水平，

       o 確認(rèn)超過(guò)IPC的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)將導(dǎo)致批量拒收，

       o 建議的IPC限度在臨床研究階段被證明是合格的。

       o HCP檢測(cè)將作為未來(lái)工藝變更可比性評(píng)估的一部分（如相關(guān)）。

       無(wú)論HCP是作為IPC常規(guī)測(cè)試還是作為放行測(cè)試，HCP分析都應(yīng)該被很好地描述和驗(yàn)證，并且接受限度應(yīng)該是合理的;所有文件應(yīng)包含在CTD中報(bào)告(第S.4節(jié)或第S.2.4節(jié))。應(yīng)評(píng)估檢測(cè)多克隆抗體的適用性(如Ph.Eur.2.6.34所述，HCP代表該工藝的覆蓋范圍)。此外，來(lái)自Ph. Eu 2.6.34的其他建議也應(yīng)由申請(qǐng)人處理。

       ◆生物類似藥產(chǎn)品：表征、同步比較、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、生物相似性、分析可比性部分

       1. 如何在臨床上證明生物類似藥的標(biāo)準(zhǔn)限度是合理的?

       答復(fù)：由于大多數(shù)生物類似藥申請(qǐng)只使用有限數(shù)量的臨床批次，因此不可能僅根據(jù)擬議生物類似藥的臨床批次設(shè)置和論證臨床階段的標(biāo)準(zhǔn)限度。因此，參比生物制品的表征結(jié)果(由申報(bào)人使用他們自己的確認(rèn)的/驗(yàn)證的用于擬議生物類似藥的測(cè)試方法獲得)可用于擬議生物類似藥標(biāo)準(zhǔn)限度的臨床標(biāo)準(zhǔn)的論證。對(duì)于已上市參比生物制品批次所獲得的結(jié)果范圍，可以假定代表各自質(zhì)量參數(shù)的臨床合格范圍。

       關(guān)于工藝相關(guān)雜質(zhì)（如宿主細(xì)胞DNA和HCP），由于工藝本身并不相似，在大多數(shù)情況下，申請(qǐng)人不能參考參比生物制品的表征結(jié)果來(lái)證明標(biāo)準(zhǔn)限度的合理性，工藝相關(guān)雜質(zhì)的控制策略應(yīng)基于生物類似藥的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)制定。

       2.是否應(yīng)該進(jìn)行同步對(duì)比以證明生物相似性？

       答復(fù)：為了證明生物相似性/分析可比性，通常不需要進(jìn)行同步對(duì)比（即單個(gè)分析實(shí)驗(yàn)/運(yùn)行的測(cè)試數(shù)據(jù)）。同步對(duì)比只對(duì)那些具有高內(nèi)在運(yùn)行間變異性的測(cè)試很重要，以便最大限度地減少這種變異性。在其他情況下，來(lái)自不同實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)是可以接受的。

       3.什么時(shí)候可以省略單克隆抗體Fc功能的表征檢測(cè)?

       答復(fù)：如果申請(qǐng)人能夠證明單克隆抗體（mAb）與不具有跨膜變體或不與已知細(xì)胞/膜相關(guān)的可溶性靶標(biāo)結(jié)合，則可以省略Fc功能測(cè)定（ADCC/CDC/ADCP）的表征檢測(cè)。在這種情況下，F(xiàn)c功能測(cè)試不需要證明制造變更后的可比性或生物相似性測(cè)試。

       4. 哪種類型的ADCC測(cè)定方法可用于證明單克隆抗體的生物相似性?

       答復(fù)：ADCC活性的評(píng)估不應(yīng)僅基于報(bào)告基因測(cè)定。需要使用雙細(xì)胞形式的"經(jīng)典"ADCC測(cè)定方法，即靶細(xì)胞加效應(yīng)細(xì)胞（如NK細(xì)胞或PBMC），以證明具有ADCC功能的單克隆抗體的生物相似性。

       5.對(duì)于單克隆抗體，是否應(yīng)將與Fc受體多晶型的結(jié)合納入生物相似性研究？

       答復(fù)：如果與FcγRIIa的結(jié)合是一個(gè)相關(guān)的質(zhì)量參數(shù)，那么生物相似性實(shí)驗(yàn)應(yīng)該包括與多晶型受體變體131H和131R的結(jié)合。

       如果與FcγRIIIa的結(jié)合是一個(gè)相關(guān)的質(zhì)量參數(shù)，那么生物相似性實(shí)驗(yàn)應(yīng)該包括與多晶型受體變體158V和158F的結(jié)合。

       ◆單克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)、ADCC活性

       1.單克隆抗體ADCC活性的常規(guī)控制需要什么標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試？

       答復(fù)：對(duì)于具有抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒 性(Antibody Dependent Cell-mediated Cytotoxicity, ADCC)活性的單克隆抗體，在標(biāo)準(zhǔn)中只需一個(gè)參數(shù)就足以驗(yàn)證該功能?？赡艿臋z測(cè)包括細(xì)胞ADCC檢測(cè)、FcγRIIIa結(jié)合或相關(guān)的糖譜檢測(cè);后兩個(gè)參數(shù)更可靠，根據(jù)它們與ADCC測(cè)定的相關(guān)性，其中一個(gè)參數(shù)優(yōu)于ADCC測(cè)定。事實(shí)上，當(dāng)效應(yīng)功能的控制是基于FcγRIIIa結(jié)合或糖譜的測(cè)試時(shí)，ADCC與提議的FcγRIIIa結(jié)合試驗(yàn)或糖基化參數(shù)之間應(yīng)該存在相關(guān)性。根據(jù)特定的分子，控制可以基于聚焦化(G0+G1+G2)，高甘露糖形式(例如M5+M6+M7+M8)，總聚焦化(G0+G1+G2+高甘露糖形式)或這些參數(shù)的幾個(gè)組合，選擇任何與ADCC最相關(guān)的指標(biāo)即可。

       ◆生物制品制劑中聚山梨酯測(cè)試部分

       1. 成品標(biāo)準(zhǔn)中是否應(yīng)包括聚山梨酯的檢測(cè)?

       答復(fù)：如果成品配方中含有聚山梨酯，并且在配方開(kāi)發(fā)研究中證明聚山梨酯是防止顆粒形成的相關(guān)成分，或者顆粒形成與聚山梨酯降解有關(guān)，那么對(duì)聚山梨酯的檢測(cè)不僅應(yīng)包括在常規(guī)放行中，還應(yīng)包括在穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)中。或者，可以提供足夠的藥物/配方開(kāi)發(fā)數(shù)據(jù)來(lái)證明聚山梨酯限度在成品的擬議有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，以證實(shí)在穩(wěn)定性研究期間省略此類檢測(cè)是合適的。

       ◆內(nèi)毒素較低回收率、內(nèi)毒素掩蔽效應(yīng)

       1、什么時(shí)候應(yīng)該調(diào)查內(nèi)毒素較低回收率(LER，也稱為"內(nèi)毒素掩蔽效應(yīng)")?

       答復(fù)：對(duì)于含有表面活性劑（如聚山梨酯）和螯合劑（如EDTA、檸檬酸鹽、磷酸鹽、組氨酸）組合的產(chǎn)品配方，應(yīng)在MAA的申報(bào)資料中提交內(nèi)毒素較低回收率（LER）的研究數(shù)據(jù)。為此，應(yīng)對(duì)未稀釋的樣品進(jìn)行加標(biāo)/保持時(shí)間研究。根據(jù)當(dāng)前的科學(xué)技術(shù)水平，應(yīng)至少進(jìn)行四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，以確保結(jié)果的有效性和準(zhǔn)確性。連續(xù)兩個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)低于50%的回收率（藥典下限），應(yīng)視為L(zhǎng)ER。

       如果檢測(cè)到LER，申請(qǐng)人應(yīng)提出適當(dāng)?shù)木徑獠呗裕ɡ鐟?yīng)優(yōu)化藥典方法或開(kāi)發(fā)替代方法）。對(duì)于發(fā)現(xiàn)具有LER效應(yīng)的產(chǎn)品，強(qiáng)烈建議根據(jù)實(shí)際制造商的數(shù)據(jù)，將細(xì)菌內(nèi)毒素的成品標(biāo)準(zhǔn)限度設(shè)定在合理可達(dá)到的最低水平。這種方法將有助于確保在成品內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)限度中建立更大的安全裕度。推薦將LER研究放在CTD的3.2.P.5.3節(jié)（方法驗(yàn)證）。

       ◆使用重組技術(shù)生產(chǎn)的非-新型輔料

       1.使用重組技術(shù)生產(chǎn)的輔料的數(shù)據(jù)要求是什么？

       答復(fù)：對(duì)于使用重組技術(shù)生產(chǎn)的輔料，不被認(rèn)為是新型輔料，需要提交某些生產(chǎn)和控制信息，以確保質(zhì)量一致。除了CTD模塊3.2.P.4"輔料控制"（標(biāo)準(zhǔn)、分析方法、方法驗(yàn)證和標(biāo)準(zhǔn)論證）外，申請(qǐng)人還應(yīng)提供以下方面的詳細(xì)信息：制造商、制造工藝說(shuō)明、材料控制、工藝驗(yàn)證、表征、雜質(zhì)檢測(cè)、穩(wěn)定性和病毒安全性評(píng)估（包括去除/清除相關(guān)模型病毒的過(guò)程能力證明）。信息應(yīng)在3.2.A.3節(jié)輔料中提供。       

       系列文章：《兔年談之一：歐盟關(guān)鍵法規(guī)和指南檢索應(yīng)用》、《兔年談之二：FDA指南更新計(jì)劃釋放行業(yè)監(jiān)管新信號(hào)》、《兔年談之三：中藥研發(fā)之激戰(zhàn)2023》、《兔年談之四：中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)體系的演變點(diǎn)滴》、《兔年談之五：燕京來(lái)文驚初夏，深夜香茗感雪風(fēng) ---也談<20230524關(guān)于加強(qiáng)委托生產(chǎn)藥品上市許可持有人監(jiān)管工作的通知征求意見(jiàn)稿>》、《兔年談之六-2025版中國(guó)藥典漸顯真容之（一）》、《兔年談之七：2025版中國(guó)藥典漸顯真容之（二）》、《兔年談之七：美國(guó)藥品短缺數(shù)據(jù)分析和展望》、《兔年談之八：中美歐三方GMP問(wèn)答對(duì)比分析》、《兔年談之九：EDQM-CEP認(rèn)證進(jìn)入2.0時(shí)代》、《兔年談之十：NMPA加入PIC/S進(jìn)度和PIC/S GMP最新變化介紹》、《兔年談之十一：大洋彼岸之風(fēng)帶來(lái)FDA對(duì)亞硝胺雜質(zhì)控制新進(jìn)展》、《兔年談之十二：上海藥品變更管理文件的進(jìn)步和不足》

       作者簡(jiǎn)介：zhulikou431，高級(jí)工程師、PDA會(huì)員、ISPE會(huì)員、ECA會(huì)員、PQRI會(huì)員、資深無(wú)菌GMP專家，在無(wú)菌工藝開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證、藥品研發(fā)和注冊(cè)、CTD文件撰寫和審核、法規(guī)審計(jì)、國(guó)際認(rèn)證、國(guó)際注冊(cè)、質(zhì)量體系建設(shè)與維護(hù)領(lǐng)域，以及無(wú)菌檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)控等領(lǐng)域皆具有較深造詣。近幾年開(kāi)始著力關(guān)注制藥宏觀領(lǐng)域趨勢(shì)分析和制藥企業(yè)并購(gòu)項(xiàng)目的風(fēng)險(xiǎn)管理工作。