佐劑又稱免疫調(diào)節(jié)劑或免疫增強(qiáng)劑，是一種用于疫苗中的添加劑，佐劑在先于抗原或與抗原混合注入機(jī)體后能夠增強(qiáng)機(jī)體對抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫反應(yīng)的類型。佐劑屬于非特異性的免疫增強(qiáng)劑，其本身不具備抗原性。一個理想的佐劑不僅能夠增強(qiáng)免疫反應(yīng)，還能使機(jī)體獲得最 佳的保護(hù)性免疫。除了上文介紹的鋁鹽佐劑、蛋白類佐劑、核酸類佐劑，本文將繼續(xù)介紹含脂類佐劑、新型油乳佐劑、其他佐劑以及復(fù)合佐劑等。

       相關(guān)閱讀：《疫苗佐劑的研究進(jìn)展簡介（上）》

       4、含脂類佐劑及其作用機(jī)制

       脂類佐劑包括脂多糖（LPS）和脂質(zhì)體兩類。脂多糖天然存在于革蘭氏陰性菌的外膜中，是天然免疫系統(tǒng)的強(qiáng)激活劑，也是細(xì)菌感染后引起適應(yīng)性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因素。脂多糖通常由3個部分組成：多糖O抗原、核心寡糖和疏水性脂質(zhì)A。哺乳動物免疫細(xì)胞通過模式識別受體復(fù)合體Toll 樣受體4 (TLR4)/髓樣分化蛋白2 (MD-2) 識別脂質(zhì)A來激活免疫細(xì)胞并釋放炎癥細(xì)胞因子，脂質(zhì) A 是天然免疫的有效誘導(dǎo)劑和免疫應(yīng)答的有效增強(qiáng)劑。研究人員使用 LPS 作為百日咳疫苗的佐劑來免疫小鼠，實驗結(jié)果顯示，LPS 不僅提高了疫苗的免疫效率，還減少了I 型超敏反應(yīng)的發(fā)生。然而，由于高毒性，基于脂質(zhì) A的佐劑被認(rèn)為不適合用于人類疫苗。LPS 是已知最活躍的病原體相關(guān)分子模式之一，針對 LPS 進(jìn)行化學(xué)或遺傳修飾以降低其毒性是其在佐劑應(yīng)用中的關(guān)鍵。GLA-SE和GLA-AF是脂質(zhì) A 的類似物，在增強(qiáng)對H5N1的保護(hù)方面特別有效，并且毒性低、副作用少。GLA-AF 也被嘗試作為許多疫苗中乳液的替代品，其中最引人注目的是大流行性流感疫苗。含脫?；瘑瘟字珹的佐劑系統(tǒng)與乙型肝炎表面抗原聯(lián)合使用，可以以更快的速度誘導(dǎo)更高的抗體效價，并能持續(xù)更長時間的保護(hù)。

       脂質(zhì)體是由天然產(chǎn)物中的非免疫原性、無毒性和可生物降解的磷脂組成的能夠包裹抗原的球體，可作為抗原遞送類佐劑，充當(dāng)遞送疫苗的工具。脂質(zhì)體作為疫苗載體系統(tǒng)的一個關(guān)鍵優(yōu)勢是它的多功能性和可塑性。利用其化學(xué)性質(zhì)，水溶性抗原 (蛋白質(zhì)、肽、核酸、碳水化合物、半抗原) 被包埋在脂質(zhì)體的水性內(nèi)部空間中，而親脂化合物 (脂肽、抗原、佐劑、連接分子) 被嵌入到脂質(zhì)雙層中，同時抗原或其他佐劑可以通過吸附或穩(wěn)定的化學(xué)連接附著到脂質(zhì)體表面。DNA 疫苗被包裹在脂質(zhì)體中，可以更有效地穿過細(xì)胞膜到細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，脂質(zhì)體在這個過程中起到保護(hù)和緩釋作用。脂質(zhì)體可以被免疫刺激分子和靶向分子進(jìn)行修飾，作為一種多功能疫苗佐劑傳遞系統(tǒng)參與免疫過程，它們能靶向免疫細(xì)胞甚至細(xì)胞器，產(chǎn)生溶酶體逃逸，促進(jìn)抗體的交叉表達(dá)，從而極大地提高疫苗的免疫效果。研究表明，脂質(zhì)體能夠增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。脂質(zhì)體與弗氏試劑或氫氧化鋁聯(lián)合使用具有協(xié)同增效的效果。脂質(zhì)體廣泛應(yīng)用于COVID-19 疫苗、腫瘤疫苗和流感疫苗等臨床試驗中。但作為佐劑，脂質(zhì)體也存在一些不足，例如在儲存過程中，磷脂中的不飽和脂肪酸會逐漸氧化；脂質(zhì)體易發(fā)生融合，在相互融合過程中可以導(dǎo)致包裹的抗原釋放出來；同時脂質(zhì)體制備的技術(shù)性較高，費用也較高。目前通過對脂質(zhì)體不斷研究，已經(jīng)設(shè)計出幾種新型脂質(zhì)體，例如超可變形囊泡 (Transfersome)、雙層間交聯(lián)的多層囊泡和固體核心脂質(zhì)體等來用于疫苗遞送。

       5、新型油乳佐劑及其作用機(jī)制

       目前FDA批準(zhǔn)上市的新型油乳佐劑代表是MF59佐劑和AS03 佐劑。MF59是在高壓條件下將角鯊烯、吐溫-80、山梨糖醇三油酸酯混合后形成的均勻滴狀乳液，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答。MF59通過誘導(dǎo)趨化因子循環(huán)，使小鼠體內(nèi)的免疫細(xì)胞發(fā)生改變，刺激體內(nèi)的免疫應(yīng)答，進(jìn)而誘導(dǎo)單核細(xì)胞向DC分化，為機(jī)體提供有效的免疫環(huán)境，并在免疫后增加IgG抗體的含量。MF59主要用于流感疫苗，它可增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答，提高流感毒株的交叉反應(yīng)性。研究表明，加入此佐劑后，面對H7N9禽流感疫情大規(guī)模暴發(fā)，即使在抗原使用量降為原來的1/4到1/2的情況下，以 MF59為佐劑的裂解疫苗仍可有效抵抗H7N9禽流感病毒的感染。MF59也有助于增強(qiáng)幼兒和老年人季節(jié)性或大流行性流感疫苗的療效。在老年人的三價疫苗中，MF59還能誘導(dǎo)比鋁佐劑更強(qiáng)烈的體液免疫反應(yīng)，可用作新型冠狀病毒?。–OVID-19）亞單位疫苗的佐劑，通過肌內(nèi)注射可增強(qiáng)基于嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型（SARS-CoV-2）蛋白的亞單位疫苗的免疫原性。

       AS03是另一種基于油包水乳液的佐劑。歐洲委員會于2009 年授予AS03佐劑的帕德米克斯（Pandemrix）上市許可。2013 年，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)了AS03 佐劑的流感 A（H5N1）單價疫苗。自此，AS03 在流感疫苗和瘧疾疫苗中開始發(fā)揮越來越重要的作用。AS03由表面活性劑聚山梨酯80 和兩種可生物降解油（即角鯊?fù)楹虳L-a-生育酚）組成。DL-a-生育酚是維生素E中生物利用率最高的形式，研究表明，添加DL-a-生育酚能夠改變先天免疫反應(yīng)的特征，提高抗體反應(yīng)。AS03可以在肌肉和引流淋巴結(jié)（dLN）中誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，引發(fā)單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和粒細(xì)胞向dLN的遷移，刺激CD4+ T細(xì)胞特異性免疫應(yīng)答。

       6、其他佐劑

       病毒樣顆粒（Viral-like particles VLPs）是由病毒殼蛋白自組裝而成的多聚體顆粒，具有適合的尺寸和幾何形狀，可作為有效的疫苗抗原遞送平臺。VLPs 通常大小為20 ~ 100 nm，便于進(jìn)入淋巴血管并靶向淋巴結(jié)，從而被專門的抗原呈遞細(xì)胞（APCs）攝取。由于其高度重復(fù)和剛性的結(jié)構(gòu)，VLPs 能夠在其表面展示多價抗原表位，有效地結(jié)合B細(xì)胞受體（BCRs），激活B 細(xì)胞，并誘導(dǎo)強(qiáng)而持久的抗體反應(yīng)。VLPs 已成功應(yīng)用于人乳頭狀瘤病毒（HPV）和乙型肝炎病毒等疫苗的開發(fā)，并已經(jīng)廣泛上市。此外，VLPs 還可以傳遞內(nèi)源性和異源性抗原，在其表面進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)或基因融合修飾。研究表明，VLPs 已成功用于寨卡病毒、流感、癌癥和腦炎等疫苗的臨床試驗。

       皂苷（Saponins）是螺旋甾烷類化合物或三萜的天然糖苷，可激活哺乳動物的免疫系統(tǒng)。天然植物中提取的皂甙與細(xì)胞膜上的膽固醇形成復(fù)合物，能共同促進(jìn) T、B 淋巴細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性 MHC-I 抗原限制性 CTL，刺激分泌多種細(xì)胞因子，因此可以作為佐劑使用。QuilA及衍生物QS-21 是具有佐劑活性并應(yīng)用最廣的皂苷類佐劑，可以用來修飾 T 細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞。QuilA 既能使外源性抗原刺激機(jī)體 Th1 免疫應(yīng)答，也能誘導(dǎo)CTL 應(yīng)答，目前已成為亞單位疫苗及癌癥疫苗的理想佐劑。

       復(fù)合佐劑

       隨著新型疫苗的發(fā)展，單一功能的佐劑往往不能滿足人們需要，因此就要利用不同成分佐劑之間的協(xié)同作用。復(fù)合佐劑就是為了最大 程度地發(fā)揮佐劑效應(yīng)，將起不同免疫效果的兩種或多種的佐劑進(jìn)行搭配使用，佐劑的復(fù)合可以進(jìn)一步地調(diào)節(jié)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答，起到更強(qiáng)的免疫保護(hù)作用。

       AS佐劑系統(tǒng)由葛蘭素史克公司于20世紀(jì)80年代末開發(fā)，主要用于增強(qiáng)疫苗的免疫原性和免疫反應(yīng)。AS佐劑系統(tǒng)的主要成分是脂多糖 (MPL)，MPL與其他輔助成分一起組成了一種能夠有效激活免疫反應(yīng)的配方。AS 佐劑系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種疫苗的開發(fā)和生產(chǎn)中，包括百日咳疫苗、流感疫苗、肺炎球菌疫苗等。通過加入AS佐劑系統(tǒng)，這些疫苗能夠在接種后引發(fā)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)，提高免疫保護(hù)水平。AS佐劑系統(tǒng)還能夠幫助延長疫苗的免疫效果，提供更持久的免疫保護(hù)。目前 FDA 已批準(zhǔn) AS01、AS03和AS04 佐劑系統(tǒng)上市。

       Covaxin( BBV152)是一種以鋁-TLR7/8激動劑為復(fù)合佐劑的滅活新型冠狀病毒疫苗， 于2021年獲得世界衛(wèi)生組織緊急使用授權(quán)。Covaxin誘導(dǎo)的中和抗體水平是鋁佐劑滅活疫苗的1.5倍，TLR7/8激動劑有助于刺激Th1 細(xì)胞偏向免疫，增強(qiáng)了Covaxin誘導(dǎo)CD8+ T 細(xì)胞反應(yīng)的能力。SCB-2019新型冠狀病毒疫苗于2022年在中國獲批緊急使用，疫苗中使用了 CpG1018-明礬的復(fù)合佐劑，在Ⅰ期臨床試驗中，CpG1018-明礬疫苗在成人和老人中首次免疫后36d的血清轉(zhuǎn)化率均達(dá)到100%，高于無佐劑疫苗組，并且誘導(dǎo)了高水平的中和抗體。SCB-2019新型冠狀病毒疫苗的Ⅱ /Ⅲ期臨床試驗也證明了接種2劑次疫苗可以對人體產(chǎn)生針對新型冠狀病毒有效的保護(hù)作用，對由任何新型冠狀病毒毒株引起的危重癥感染、中度至重度感染和有癥狀感染的保護(hù)效力分別為100%、83.7%和67.2%。

       AS37是將合成的 TLR7a( TLR7 激動劑) 吸附于氫氧化鋁上構(gòu)成的新型復(fù)合佐劑，能夠增強(qiáng)Th1 細(xì)胞偏向的免疫反應(yīng)。AS37 復(fù)合佐劑在 C 群腦膜炎球菌結(jié)合疫苗的臨床前小鼠實驗中展現(xiàn)出了良好的佐劑效果，三種劑量的AS37 佐劑疫苗組在初次免疫后均可顯著增加抗 C 群腦膜炎奈瑟菌血清殺菌活性效價值，高于明礬佐劑疫苗組，并且在第2劑次免疫后8個月，三種劑量的AS37 佐劑疫苗組抗 C 群腦膜炎奈瑟菌血清殺菌活性效價值均保持在較高水平。

       皮卡（PIKACA）是我國獨有的一種用于人體的疫苗佐劑，它是由雙鏈聚肌苷酸、卡那霉素、氯化鈣組成的復(fù)合物。2018年國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)了人用皮卡狂犬病疫苗的臨床試驗。人用皮卡狂犬病疫苗接種后2h即產(chǎn)生高滴度的IFN，同時增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫，提升其免疫效力甚至比疫苗與抗血清的結(jié)合效果更好。目前國外已完成人用皮卡狂犬疫苗的Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗，我國也在進(jìn)行Ⅰ期臨床。

       參考資料

       [1]吳小紅,李加.新型疫苗佐劑及給藥途徑[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù),2023,18(S1):1-9.

       [2]曾振,王海寧,張志芳等.新型疫苗佐劑的研究進(jìn)展[J].生物工程學(xué)報,2021,37(01):78-87.

       [3]韓冰,湯思淇,朱大帷等.新型疫苗佐劑研究進(jìn)展[J].中國畜牧獸醫(yī),2023,50(06):2460-2467.

       [4]夏芯,朱雅文,周利等.疫苗新型佐劑的作用機(jī)制和研發(fā)進(jìn)展綜述[J].中國疫苗和免疫,2023,29(04):474-482.

       [5]張榮,李菁,武永淑,李小明,董金杰,劉學(xué)榮.新型疫苗佐劑的研究進(jìn)展[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2021,(第3期).

       作者簡介：小泥沙，食品科技工作者，食品科學(xué)碩士，現(xiàn)就職于國內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司，從事營養(yǎng)食品的開發(fā)與研究。